1，2-二氯乙烷染毒对体外培养SW620细胞增殖、周期和凋亡的影响研究

【摘要】：[摘要]目的探讨不同浓度和不同时间1,2-二氯乙烷(1,2-DCE)染毒对瞬时干扰和未干扰的体外培养细胞增殖、周期和凋亡能力的影响。方法不同浓度1,2-DCE染毒0.5或1h, MTT(四甲基偶氮唑盐)法检测活细胞相对数和相对活力；流式细胞术(FCM)分析细胞周期和凋亡；siRNA瞬时干扰SIRT1表达水平；RT-PCR检测mRNA的表达水平。结果第一部分：1,2-DCE染毒SW620细胞。MTT法检测发现,随1,2-DCE染毒剂量增加和染毒时间延长,细胞相对存活率逐渐降低。与DMSO组比较,染毒0.5h,25、75、100、125、150、175、200uM组的细胞相对存活率降低(p0.05或p0.01)；染毒1h,75、100、125、150、175、200uM组的细胞相对存活率降低(p0.05或p0.01)；与0.5h各组比,175uM组染毒1h的细胞相对存活率降低(p0.01)；增殖曲线经标准化拟合后发现,染毒0.5h,1,2-DCE的最适IC5o为89.41uM,95%的可信区间为(85.23uM,93.79uM);染毒1h,1,2-DCE的最适IC50为87.68uM,95%的可信区间为(83.71uM,91.82uM)。 FCM法检测发现,与对照组比较,1,2-DCE染毒1h,25、50、100、150、200uM组的Go／G1期降低(p0.05或p0.01)；25、50、100uM组的S期降低(p0.05或p0.01)；25、50、100、150、200uM组的G2／M期升高(p0.05或p0.01)；但各组均不引起细胞凋亡。第二部分：1,2-DCE染毒瞬时干扰SIRT1的SW620细胞。MTT法检测发现瞬时干扰后24、48、72、96h, siRNA与对照组的细胞相对存活率的差异都有统计学意义,其中瞬时干扰后72h, siRNA与negative组、wild组差异有统计学意义(p0.01)；negative组与wild组差异无统计学意义。MTT法检测发现SIRT1瞬时干扰72h,100uM1,2-DCE染毒1h,1,2-DCE组内,siRNA组与wild组比较,有统计学差异(p 0.05); siRNA组内,1,2-DCE组与PBS组、DMSO组比较,有统计学差异(p0.05)；同时在对照组内,瞬时干扰及1,2-DCE染毒各自所造成的细胞增殖抑制情况与前期实验结果一致。结论1,2-DCE能够抑制体外培养SW620细胞增殖；染毒1小时,可使细胞周期停滞在G2／M期,但不诱导细胞凋亡；瞬时干扰SIRT1基因可使细胞增殖抑制,1,2-DCE作用瞬时干扰后的SW620细胞,两者对细胞增殖抑制可能有叠加作用；1,2-DCE诱导体外培养SW620细胞增殖抑制、细胞周期时相分布改变可能与DNA损伤及修复有关。 【关键词】：1 2-二氯乙烷 SIRT1 siRNA 细胞增殖 细胞周期阻滞 凋亡
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R114
【目录】：

• 致谢4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 缩略语9-11
• 1 引言11-17
• 2 材料与方法17-21
• 3 结果21-30
• 4 讨论30-34
• 5 结论34-35
• 参考文献35-39
• 综述39-48
• 参考文献45-48
• 作者简历及在读期间所取得的科研成果48

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