三苯甲烷酸性染料与血清白蛋白相互作用的光谱研究

【摘要】：第一章：本章简要综述了近二十年多来光谱法研究蛋白质的研究进展，阐述了研究蛋白质与小分子探针作用的应用以及相互作用机理，提出了本文的立题意义及研究内容。第二章：对两种三苯甲烷酸性染料甲基蓝和苯胺蓝的紫外及荧光光谱特性进行了详细研究，测定了它的光谱学参数、荧光量子产率，并详细考察了影响发光的影响因素(如pH值，离子强度，介质条件)，这为它们在化学生物分析中的应用及其分析测定方法的建立提供了发光光谱学的理论依据。第三章：应用荧光及紫外光谱法研究了甲基蓝与人血清白蛋白(HSA)分子间的结合反应，测定了不同温度下的结合常数(17℃，K_A=2.576×10~5；27℃，K_A：3.266×10~5；37℃，K_A=7.464×10~5)和结合位点数在不同温度下均为1，实验结果表明甲基蓝对蛋白质内源荧光的猝灭机理为静态猝灭，依据热力学常数确定了两者间的作用力类型为疏水作用力与静电作用，根据Forster能量转移理论，求得能量转移效率和能量转移距离分别为0.63和2.06。第四章：用荧光光谱法研究了水溶性苯胺蓝与人血清白蛋白的结合反应。苯胺蓝对HSA的猝灭机理为静态猝灭，测得了该反应在不同温度下的结合常数及结合位点数，并探讨了它们的相互作用机理，结果表明苯胺蓝主要以静电作用力与HSA相互作用。进一步用同步荧光技术研究了AnB对HSA构象的影响，结果表明，HSA的荧光主要源于色氨酸残基，AnB对HSA的构象产生了影响。第五章：本文的研究目的是以甲基蓝为荧光探针，采用同步荧光法测定HSA。三苯甲烷酸性染料甲基蓝在pH 4.1时以酸式存在。所以可以与HSA结合形成络合物。当在甲基蓝溶液中加入HSA时，甲基蓝的同步荧光强度显著增强。因此，基于甲基蓝与HSA的相互作用建立了一种简便、快速、高灵敏度、线性范围宽的HSA测定方法。HSA的检出限为0.03μg mL~(-1)。人血清样品中的HSA测定结果满意，证明了此方法的可 【关键词】：荧光 同步荧光 共振光散射 三苯甲烷酸性染料 人血清白蛋白
【学位授予单位】：山西大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：Q51
【目录】：

• 中文摘要8-10
• 英文摘要10-12
• 第一章 综述12-32
• 1.1 引言12
• 1.2 蛋白质的光谱法研究进展12-20
• 1.2.1 吸光光度法12-16
• 1.2.2 荧光光谱法16-18
• 1.2.3 共振光散射光谱法18-19
• 1.2.4 同步荧光法19
• 1.2.5 磷光分析法19-20
• 1.3 荧光法研究蛋白质与探针相互作用机理20-23
• 1.3.1 相互作用模型20-22
• 1.3.2 相互作用力类型22-23
• 1.4 立题背景及意义23
• 1.5 本文研究内容23-24
• 参考文献24-32
• 第二章 甲基蓝和苯胺蓝的光谱特性研究32-40
• 2.1 引言32-33
• 2.2 实验部分33
• 2.2.1 试剂与仪器33
• 2.2.2 实验步骤33
• 2.3 结果与讨论33-39
• 2.3.1 甲基蓝与苯胺蓝的紫外可见光谱特性33-35
• 2.3.2 甲基蓝与苯胺蓝的荧光光谱特性35-38
• 2.3.3 分析特性38-39
• 2.4 结论39
• 参考文献39-40
• 第三章 荧光法研究甲基蓝与人血清白蛋白的相互作用40-48
• 3.1 引言40
• 3.2 实验部分40-41
• 3.2.1 试剂和仪器40-41
• 3.2.2 实验方法41
• 3.3 结果与讨论41-46
• 3.3.1 甲基蓝对HSA的荧光猝灭类型41-43
• 3.3.2 结合常数及结合位点43-44
• 3.3.3 作用力类型的研究44-45
• 3.3.4 甲基蓝与HSA之间的能量转移45-46
• 3.4 结论46
• 参考文献46-48
• 第四章 荧光法研究苯胺蓝与人血清白蛋白的相互作用48-55
• 4.1 引言48
• 4.2 实验部分48-49
• 4.2.1 仪器与试剂48-49
• 4.2.2 实验方法49
• 4.3 结果与讨论49-53
• 4.3.1 AnB对HSA的荧光猝灭类型49-50
• 4.3.2 结合常数和结合位点数的测定50-51
• 4.3.3 AnB与HSA的作用方式51-52
• 4.3.4 AnB对HSA构象的影响52-53
• 4.4 结论53
• 参考文献53-55
• 第五章 甲基蓝为探针同步荧光法测定人血清白蛋白55-63
• 5.1 引言55
• 5.2 实验部分55-56
• 5.2.1 试剂与仪器55-56
• 5.2.2 实验步骤56
• 5.3 结果与讨论56-61
• 5.3.1 甲基蓝与HSA结合的同步荧光光谱56-58
• 5.3.2 甲基蓝浓度的影响58
• 5.3.3 酸度和温度的影响58-59
• 5.3.4 分析方法的建立59-60
• 5.3.5 干扰实验60
• 5.3.6 样品分析60-61
• 5.4 结论61
• 参考文献61-63
• 第六章 甲基蓝与人血清蛋白作用的共振光散射光谱及其应用63-71
• 6.1 引言63
• 6.2 实验部分63-64
• 6.2.1 仪器与试剂63
• 6.2.2 实验方法63-64
• 6.3 结果与讨论64-69
• 6.3.1 共振光散射原理64
• 6.3.2 甲基蓝与HSA相互作用的RLS光谱64-65
• 6.3.3 适宜的反应条件65-67
• 6.3.4 分析测定67-68
• 6.3.5 机理探讨68-69
• 6.4 结论69
• 参考文献69-71
• 第七章 β-CD和HP-β-CD对甲基蓝与HSA相互作用的影响71-79
• 7.1 引言71
• 7.2 实验部分71-72
• 7.2.1 试剂与仪器71
• 7.2.2 实验步骤71-72
• 7.3 结果与讨论72-78
• 7.3.1 HSA与甲基蓝的相互作用72-73
• 7.3.2 甲基蓝与β-CD和HP-β-CD的作用研究73-75
• 7.3.3 甲基蓝与β-CD和HP-β-CD作用的包结比和包结常数测定75-76
• 7.3.4 CDs、甲基蓝与HSA三者的作用研究76-78
• 7.4 结论78
• 参考文献78-79
• 附录: 硕士期间发表的论文题录79-80
• 致谢80-81
• 发表论文81-86
• 承诺书86

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